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通過COA報告如何對血清進行質(zhì)量判斷

發(fā)布時間: 2023-07-07  點擊次數(shù): 804次

 

胎牛血清質(zhì)量如何有多種方法去進行判斷,一種是從產(chǎn)品生產(chǎn)商提供的COA報告中檢查幾個關(guān)鍵指標(biāo)進行判斷,二種是通過肉眼觀察物理性狀和實驗測試其對細胞的生長的維持和促進效果,包括接種率、生長曲線、細胞特征的維持效果。

其中比較快速便捷的方法是讀懂產(chǎn)品生產(chǎn)商提供的COA,今天我們先介紹如何通過COA報告對胎牛血清進行質(zhì)量判斷。

胎牛血清(fetal bovine serum)是一種取自牛胚胎的血清,常用于配置動物細胞的培養(yǎng)基。胎牛血清含有各種生長因子,且抗體含量少。

 

COA的作用

COA全稱Certificate of Analysis,它是廠家按照一定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范來對產(chǎn)品進行的一系列的性能指標(biāo)測試,說人話就是:質(zhì)檢報告。

第一步,先看明白COA。

結(jié)合國家制定的標(biāo)準(zhǔn)《中國生物制品主要原輔料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn) 2000年版》針對胎牛血清最基礎(chǔ)的看明白4項關(guān)鍵指標(biāo)。分別是:有害微生物、內(nèi)毒素、總蛋白含量、血紅蛋白含量

 

1、COA關(guān)鍵指標(biāo) : 有害微生物

根據(jù)《中國生物制品主要原輔料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn) 2000年版》規(guī)定:牛血清制品應(yīng)過濾除菌后制成,不能含有牛腹瀉病毒,不能含有噬菌體、支原體、真菌污染。

首先,胎牛血清不能含有有害微生物,包括細菌、真菌、支原體、噬菌體和國家規(guī)定的特定病毒。

所以,任何批次的胎牛血清,其上述質(zhì)檢必須要做,而且結(jié)果必須為不能檢出。其有害微生物的檢測結(jié)果為陰性。

2、COA關(guān)鍵指標(biāo) : 內(nèi)毒素

根據(jù)《中國生物制品主要原輔料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn) 2000年版》規(guī)定:血清中細菌內(nèi)毒素含量不應(yīng)高于10 EU/ml

內(nèi)毒素來源于革蘭氏陰性菌的細胞壁成分,主要化學(xué)成為脂多糖LPS。當(dāng)細菌死亡溶解時釋放。內(nèi)毒素容易刺激細胞產(chǎn)生免疫反應(yīng),有一定毒性作用。

2000年版的國內(nèi)生物制品質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)明確指引了血清內(nèi)毒素含量的最高上限為10EU/ml,到了2005年的中國藥典更是將此標(biāo)準(zhǔn)提高到<5EU/ml。

3、COA關(guān)鍵指標(biāo) : 總蛋白含量

根據(jù)《中國生物制品主要原輔料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn) 2000年版》規(guī)定:血清中蛋白質(zhì)含量應(yīng)該在3.5%~5%(w/V)

這個指標(biāo)的意義在于判斷該批次胎牛血清的牛齡。

胎牛血清的采集對象是指在母牛體內(nèi)5-8個月牛齡的胎牛,隨著胎牛在母牛體內(nèi)逐步發(fā)育成熟,它的血清中的蛋白質(zhì)含量也會不斷增高。

如果蛋白質(zhì)含量太高,說明胎牛血清采集的時間可能較晚,甚至是小牛出生后再采集的。

如果太低呢?有可能在生產(chǎn)過程中人為稀釋了血清。所以品質(zhì)好的胎牛血清,其蛋白質(zhì)含量不能太高、也不能太低。在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)即可。

4、COA關(guān)鍵指標(biāo) : 血紅蛋白


根據(jù)《中國生物制品主要原輔料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn) 2000年版》規(guī)定:血清中血紅蛋白含量不應(yīng)高于 0.02% (w/v)

 

 

         國內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)對牛血清進行了描述定義:淺黃色、澄清、稍粘稠的液體,且無溶血、無異物。

不少同學(xué)反饋,不同批次的血清的顏色會有不同,有的偏黃、有的偏紅。市場上甚至還流行過通過看顏色是否紅潤來判斷血清質(zhì)量高低的說法。

其實,胎牛血清顏色有的深有的淺,我認(rèn)為都是正?,F(xiàn)象。

因為胎牛尚未發(fā)育完善,因此其凝血功能不完善,所以采集血清時難以避免溶血。只要有溶血,就會出現(xiàn)血紅蛋白溢出到血清中。

決定血清色澤的因素是血紅蛋白和膽紅素,前者含量高,則呈現(xiàn)偏紅的顏色,后者高則呈現(xiàn)為金黃色。不能簡單的以顏色深淺來判斷其質(zhì)量好壞。

需要注意的反而是COA中血紅蛋白含量是否在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi),因為血紅蛋白超標(biāo),意味著血清采集過程出現(xiàn)了比較嚴(yán)重的溶血現(xiàn)象。從一定程度上反映了采集流程的不規(guī)范和不嚴(yán)謹(jǐn)。

 

通過COA,可以幫助我們分析、判斷該批次血清是否存在質(zhì)量隱患。通過觀察連續(xù)批次的COA,可以判斷該品牌的血清生產(chǎn)工藝、血清品質(zhì)是否穩(wěn)定。對其中關(guān)鍵指標(biāo)例如內(nèi)毒素、血紅蛋白的分析,可以幫助我們找出日常實驗遇到問題的原因。例如細胞狀態(tài)好壞。

 

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